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    菌种制作基础:平菇一级菌种培养基制备方法

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    • 烧锅炉没人要

        培养基虽然种类繁多,配方各异,但配制方法基本相同,都要经过营养物质的选择、称量调配、调节pH、分装和灭菌等步骤。

          (1)营养物质的选择:

        平菇一级种培养基的选择是根据一级种的用途和当时材料获得的难易决定的。如配制生产用的一级种培养基,就可选择上述配方中的任何一种,而配制菌种保藏用的培养基就必须用配方(8)。平菇一级种培养基使用的材料中,有些材料的种类、浓度、化学成分相对稳定,如磷酸二氢钾、硫酸镁等,有些天然植物体或动植物提取的成分相对不甚稳定,要十分注意,如马铃薯、蛋白胨、麦麸等。

          发芽的马铃薯不能直接使用。使用时要将刚刚出现的萌芽深深挖掉,否则芽眼处的龙葵碱,对平菇菌丝生长有毒害作用。出芽较大的马铃薯不能使用。木屑、麦麸、玉米粉、棉籽壳等农副产品,使用前要认真检查,生虫、发霉和不新鲜的不能使用,昆虫的代谢物和霉菌产生的毒素都对平菇菌丝有毒害作用。不够洁净的琼脂要事先浸泡冲洗去杂。

          (2)称量:

        培养基配方中标出的水1000ml,实际上是将各种营养物质都容于水后的营养液的容量,而不完全是水。配制好后,最后总容量达到1000ml。

          (3)调配:

        植物体材料煮沸用其汁,一般煮沸20~30min,用2~4层纱布过滤。如马铃薯、玉米粉、木屑、麦麸等。难溶解的物质先溶解,如蛋白胨,然后再加入易溶解的物质。化学试剂后加入,不断搅拌使其均匀,而不与植物体材料一起煮沸。如葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁等。

          在水煮取汁的过程中,水不足时可加水至足量,调配到最后,容量不足时可加水补足至1000ml。

          (4)调节pH:

        不同平菇品种生长发育最适pH不同,不同地区,不同水源的pH也不同。因此,需要调节。通常先用pH试纸测定已调配好的培养基,然后再用稀酸或稀碱溶液调节。平菇一级种的pH调节常用的酸性溶液是柠檬酸和乙酸溶液,常用的稀碱溶液是碳酸氢钠和碳酸钠液。

          (5)分装:

        培养基调配好后,调节好pH即可分装。一级种常用的是玻璃试管,规格为18~20cm(长)18~20mm(口径)。分装试管的装置可以使用漏斗式分装器,也可以自行设计使用倒“V”字形虹吸式分装器。分装时,在漏斗中或烧杯中加满培养基。这后一种分装器,分装前要用吸球先将培养基吸至低于烧杯中培养基的液面,然后才能分装。一手执自由夹控制培养基的流动,另一手执试管接受流下来的培养基,达到所需量时,关闭自由夹。如此反复分装至完毕。分装时要注意:①流出的培养基不要沾在近管口的壁上,以防日后棉塞生霉,一旦管口附近沾有培养基,待凝固后用接种钩扒出,并用潮湿洁净的纱布擦拭干净;②培养基装至试管的1/5~1/4处,不可过少,也不必过多。

          分装完毕后加盖棉塞。棉塞要用干净的新棉花制做。棉塞要上下粗细均匀,松紧合适,以塞好后手提时不掉为宜。棉塞的长度以塞入试管内1.5~2.0cm,外露1.5cm左右为宜。然后7支或10支捆成一捆,管口端用牛皮纸或防潮纸包好扎紧,以防灭菌时冷凝水打湿棉塞。

          (6)灭菌:

        试管分装打捆后,竖立于灭菌锅内灭菌。这是培养基制备的重要一步。灭菌效果是否良好,是关系到培养基能否使用的关键环节之一。这一步既要求灭菌彻底,又要求营养成分不致改变。因此,要使用高压蒸汽灭菌。

          使用高压锅灭菌时,要先加足水,将试管竖直码放,加盖拧好,然后接通热源加热。由于不同型号的高压锅内部构造不完全相同,所以,使用中的操作要严格按产品说明书进行。当压力达到0.1~0.11MPa开始计时,保持这一压力30min,即可达到灭菌目的。灭菌完毕后,待压力降至零后排气、开盖,将培养基趁热摆成斜面。待凝固后,抽取10~20支试管斜面于28℃培养箱内培养24~28h,以检查灭菌效果。培养后若培养基表面无微生物生长,表明灭菌成功,可以使用。如有微生物出现,则灭菌不彻底,不能使用,要再行灭菌后倒出,洗涤试管,重新制备。当时不用的试管斜面可保存在清洁干燥避光的地方,以备随时取用。制备一级种培养基时,配制和灭菌要紧密衔接,不可隔夜灭菌。

        可以用来制备平菇一级种的培养基很多,常用的有PDA培养基、PDA综合培养基、PDYA综合培养基、PDPA综合培养基、木屑综合培养基、麦麸综合培养基、玉米粉综合培养基等。

          常用配方

          (1)PDA培养基:

          马铃薯(去皮)200g 葡萄糖 20g 琼脂 10~20g 水 1000ml pH6.2~6.5

          (2) PDA综合培养基:

          马铃薯(去皮)200g 葡萄糖 20g 琼脂 10~20g 水 1000ml pH6.2~6.5 硫酸二氢钾 2g 硫酸镁 0.5g

          (3)PDYA综合培养基:

          马铃薯(去皮)200g 葡萄糖 20g 琼脂 10~20g 水 1000ml pH6.2~6.5 硫酸二氢钾 2g 硫酸镁 0.5g 酵母粉 2g

          (4)PDPA综合培养基:

          马铃薯(去皮)200g 葡萄糖 20g 琼脂 10~20g 水 1000ml pH6.2~6.5 硫酸二氢钾 2g 硫酸镁 0.5g 蛋白胨 2g

          (5)木屑综合培养基:

          马铃薯(去皮)200g 葡萄糖 20g 琼脂 10~20g 水 1000ml pH6.2~6.5 硫酸二氢钾 2g 硫酸镁 0.5g 阔叶木屑 100g

          (6)麦麸综合培养基:

          马铃薯(去皮)200g 葡萄糖 20g 琼脂 10~20g 水 1000ml pH6.2~6.5 硫酸二氢钾 2g 硫酸镁 0.5g 麦麸 50~100g

          (7)玉米粉综合培养基:

          玉米粉 50~100g 马铃薯(去皮)200g 葡萄糖 20g 琼脂 10~20g 水 1000ml pH6.2~6.5 硫酸二氢钾 2g 硫酸镁 0.5g

          (8) 保藏用培养基:

          马铃薯(去皮)200g 葡萄糖 20g 琼脂 10~20g 水 1000ml pH6.2~6.8 硫酸二氢钾 3g 硫酸镁 1.5g 维生素B1 微量

        培养基配制原则和种类

        1. 配制原则

        培养基的配制要遵循以下原则:

          (1)要含有所培养的菌株生长所需要的各种营养物质,如糖类、有机氮、矿物质等。

          (2)所含的养分浓度适宜,比例平衡,利于培养物的吸收利用。如一级种培养基糖的浓度以2%为宜,过高和过低都对平菇菌种生长不利。

          (3)要有适宜的pH和缓冲能力。生物的代谢都是在一定的pH范围内进行的,没有适宜的pH,就不能正常生长。另外,生物在生长过程中,产生有机酸释放于基质中,使基质逐渐变酸,甚至酸至pH不适于生物的生长和生存。因此,培养基一定要具备一定的缓冲能力,以减少培养物生长后期或保藏期间产生的有机酸对自身的不良影响。

          (4)一定的氧化还原电位。

          (5)用的各种成分要视其化学性质调配,防止混合后发生反应,生成不利于平菇菌种生长的物质。

          2. 培养基的种类

        按培养基的状态,可以分为液体培养基和固体培养基两大类;按培养基的成分可以分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基三大类;按用途可分为普通培养基、选择性培养基和菌种保藏用培养基三大类。

          液体培养基:这是一类不加凝固剂的培养基,凡不以植物体直接作培养基成分的培养基都可以根据需要配制成液体培养基。用液体培养基培养的菌种称液体菌种。

          固化固体培养基:固化培养基是在营养液中加凝固剂而成,凝固剂有琼脂(洋菜)、明胶和硅胶三种。食用菌的培养基常用的凝固剂是琼脂。除此之外,还有直接用植物体制成的固体培养基,如棉籽壳、玉米芯、稻草、麦粒、玉米粒等,用以生产二级种和三级种。凡用固体培养基培养的菌种称固体菌种。

          天然培养基:天然培养基是用天然的动植物组织等为原料配制成的。所含成分复杂,化学成分不清,材料来源广泛是平菇菌种生产中最常用的培养基。

          合成培养基:合成培养基是用成分以知的化学药品配制而成的培养基,成分清楚,常用来做精确的遗传学和生理生化方面的研究。这类培养基的营养成分较天然和半人工合成培养基单调得多,不宜于生产上使用。

          半合成培养基:这类培养基由成分以知的化学药品和成分复杂的天然物质混合而成,如常用的PDA培养基、PDYA培养基等。平菇一级种使用的正是这类培养基。

          普通培养基:这类培养基常用来进行日常生产,一般菌种完成培养要及时使用。这类培养基配制时不需考虑太大的缓冲能力。

          选择性培养基:这是专门为某一种微生物生长而配制的培养基,如感染某种细菌的平菇一级种可以用含有10%棉籽壳浸出液的PDA培养基继代培养数次,即可得到纯化,这种培养基利于平菇菌丝生长,而抑制细菌生长,实属选择性培养基。

          菌种保藏用培养基:这类培养基专门用来菌种保藏。配制时要注意:①养分不能过剩,以防徒长;②有较大的缓冲能力。因此,菌种保藏用培养基要养分略贫,适量加大缓冲容大的盐类,如磷酸二氢钾、硫酸镁等。

        来源:[《中国平菇生产》]   转自:普宁山区信息网 收录时标题作了修改

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