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    二氧化氯(消毒剂)对灵芝菌丝生长的影响

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        灵芝作为药用真菌其功效已家喻户晓。近年来灵芝作为保健食品和美容化妆品的添加剂,其应用日益广泛。传统方法栽培灵芝,培养料均要高温灭菌。笔者在筛选灵芝培养的消毒剂时,发现二氧化氯对各类微生物都有较强的杀灭和抑制作用,而且对人畜无害[1],但对灵芝菌生长却作用甚微。本文初步研究了不同浓度二氧化氯对灵芝菌丝生长的影响,以及7种不同灵芝菌耐受二氧化氯的能力。

        1  材料与仪器

        1.1   供试菌种 赤芝(ganoderma.lucidum)as. 565,由本系提供。美国灵芝、日本灵芝、惠州灵芝、信州灵芝、紫芝、黑芝均购自山东金乡真菌研究所。杨树菇、云芝、茯苓、茶新菇、金针菇均购自华中农业大学。霉菌(黑曲霉、根霉、青霉),细菌(大肠杆菌、枯草杆菌)由本系提供。

        1.2   斜面培养基(%)马铃薯(去皮)20;葡萄糖 2;kh2po4 0.3;mgso4?7h2o  0.15;琼脂 2;ph6.5。

        1.3  摇瓶种子和发酵培养基(%)葡萄糖20 g;蛋白胨10 g;酵母膏2 g;水1 000 ml;ph自然。

        1.4  药品二氧化氯(clo2)为深圳市科瑞德消毒用品科技开发有限公司产品,商品制剂 clo2含量为2%(w?v-1),用前加适量柠檬酸活化。其他化学试剂均为国产分析纯。

        1.5  仪器恒温培养箱 pyx-dhs-60×75-bs  上海跃进医疗器械厂,高温消毒柜 tomyss-325  tomy kogyo co.ltd.日本,mfs-11多功能三维旋混仪(摇瓶机) 深圳潘西诺生物科技有限公司。

        2  方法

        2.1   clo2对霉菌和细菌的抑制作用每个培养皿中加入20 ml斜面培养基,趁热加入 clo2,摇匀,使 clo2制剂最终浓度为0.1%~1.0%(每100 ml培养基中加 clo2制剂0.1 ~1.0 ml),以未加 clo2并经高压灭菌过的培养基作为对照。涂布法接种霉菌和细菌,每个浓度每种菌各接3个培养皿,霉菌置于28℃、细菌置于37℃恒温培养,隔天观察生长情况,培养5 d。

        2.2  clo2对赤芝的抑制作用 方法同上述,clo2浓度为0.1%~5.0%,每个浓度设3个重复。接入赤芝菌丝,置于28℃恒温培养,隔天观察菌丝生长情况,培养10 d。                           

        2.3   clo2对其他种灵芝及食用菌的影响根据上述实验结果,确定培养赤芝时 clo2的最适浓度为0.7%。在斜面培养基中,加入 clo2,使其最终浓度为0.7%。接入其他灵芝菌和食用菌,每种菌种设3个重复,培养8~12 d。

        2.4  clo2对灵芝摇瓶培养的影响 将葡萄糖、蛋白胨培养基1 000ml装入3 000 ml三角瓶中,加入0.7%  clo2,立即用保鲜膜密封,摇匀,放置1 h,然后用灭过菌的棉塞替换保鲜膜,另设对照组,接入赤芝液体菌种,接种量10%。放入多功能三维旋混仪中培养,摇瓶温度30℃、转速为150 r/min。摇瓶3~4 d,发酵液有浓厚的灵芝特有的气味,并伴有大量的菌丝球时,可终止发酵。将发酵液在100目筛网中过滤,用自来水反复冲洗,然后将菌丝体置于80℃烘干至恒重,称重。以每升培养基中含菌丝干重表示(g?l-1)。

        3  结果

        3.1   clo2对霉菌、细菌的抑制作用由表1可知,对照管5 d之内都长满,而0.1%~1.0%的 clo2对上述微生物有明显的抑制作用。其中真菌比原核微生物耐受 clo2的能力强。

        表1  clo2对霉菌、细菌的抑制作用(略)

        +++表示菌丝或菌落长满平板;-表示无菌丝或菌落生长

        3.2   不同浓度 clo2对赤芝的抑制作用由表2得知,clo2浓度在0.6%~0.7%时对赤芝有一定的抑制作用,使得赤芝萌发比对照晚2 d,但菌丝长满平板的时间均为10 d。clo2浓度在0.8%~1.0%时,对灵芝的生长有明显的抑制作用,浓度2.0%时完全抑制赤芝菌丝的生长。
       
        根据上述的结果,培养赤芝时,选用 clo2的浓度为0.7%,此浓度对霉菌和细菌抑制作用强,但对赤芝的生长影响不大。

        3.3  0.7% clo2对其他灵芝菌及食用菌的抑制作用表3中每种菌都设有对照组,其8~10 d菌丝都能长满。表3中0.7% clo2能完全抑制紫芝的生长,原因还有待进一步研究。另外实验所选用的几种食用菌都有明显的抑制作用。

        表2  不同浓度 clo2对赤芝的抑制作用(略)

        +++表示菌丝或菌落长满平板;-表示无菌丝或菌落生长

        表3  0.7% clo2对灵芝菌及食用菌的抑制作用(略)

        3.4   clo2对灵芝液体培养的影响由于多功能三维旋混仪每次只能放2个3 000 ml的三角瓶,因此摇瓶试验需分批进行。结果见表4。

        表4  灵芝菌在摇瓶培养基培养的结果(略)   
       
        由表4得知,对照组的平均产量是4.66g,实验(批号)组平均的产量是4.38g。实验组在摇瓶过程中没有染菌,只是发酵周期比对照组多1 d。实验中发现:实验组的摇瓶棉塞需经高温灭菌,提示发酵罐实验需要无菌空气。摇瓶培养基配比和发酵罐试验有待进一步研究。

        4  讨论

        4.1  添加 clo2的平板应用于灵芝子实体菌丝分离,尤其是野外菌种采集,效果良好。

        4.2   clo2可应用于本实验条件下灵芝菌丝液体培养,工艺简单,生产成本低。

        参考文献

        [1]  张  鑫. 二氧化氯的应用和研究[j].安徽农业大学学报,1996,23(4):610.

        [2]  曾东方,罗信昌. 强力安对食用菌生产中杂菌的毒力测定[j].微生物学杂志,1998,18(3):37.

        基金项目:广东省深圳市自然科学基金资助项目(no.00107078)

        (深圳职业技术学院,广东 深圳   518055) 摘自:时珍国医国药  

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