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    学术论文:北虫草子实体组织分离技术试验

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      北虫草子实体组织分离技术试验

      许庆国
      (泰安市农业科学研究院,山东泰安 271000)
      《食用菌》2013.1

        摘要 北虫草菌种在保藏一段时间后,菌种会失去活力,衰老退化,造成产量下降,甚至绝产。因此,规模生产菌株遗传性状保持稳定是很重要的。试验用北虫草子实体的两个部位进行分离试验,优选出适合北虫草生产的分离菌种。试验结果:选取鲜嫩北虫草子实体顶端靠尖1~2cm处,不去皮,结果表现性状优异,遗传性状稳定一致。而在子座以上部位,去皮移植,则表现生长力弱。
        关键词 北虫草菌种 子实体 分离技术

        北虫草,又名北冬虫夏草,蛹虫草,和冬虫夏草同属不同种,具有极高的营养价值和医药价值。随着冬虫夏草数量日趋减少,作为冬虫夏草的替代品,北虫草越来越受到人们的喜爱。大规模生产遗传性状稳定是关键。北虫草菌种在保藏一段时间后,菌种会失去活力,衰老退化,造成产量下降,甚至绝产。为保证生产的连续性和优质高产的子实体,笔者对北虫草子实体不同部位进行组织分离试验,以期分离出和原菌种性状一致的菌株,有效的保持菌种活力,为规模化生产北虫草提供性状稳定的菌种资源。

        1 材料与方法

        1.1 试验菌株 北虫草Q保存于山东省泰安市农科院,分离材料为北虫草Q子实体。
        1.2 供试培养基 ① 母种培养基:乳糖15g/L,蔗糖20g/L,蛋白胨15g/L,牛肉膏5g/L,磷酸二轻钾0.2%,硫酸镁0.1%,VB1 20mg,VB6 10mg,琼脂2%,水1000mL[1]。② 液体培养基:马铃薯100g/L,蔗糖20g/L,牛肉膏5g/L,蛋白胨15g/L,磷酸二轻钾2g/L,硫酸镁1g/L,维生素B1 2片,B6 1片[2]。
        1.3 其它试验器材 接种箱,高压锅,恒温震荡摇床等。
        1.4 试验方法
        1.4.1 分离 选取生长正常,鲜嫩,橘黄色北虫草Q子实体,于无菌接种箱内,按无菌操作要求,用75%酒精擦拭子实体,再用无菌水冲洗晾干,手术刀过酒精灯火焰,反复灼烧,待降温后,在灭菌过的培养皿切取子实体上部(距顶端1~2cm处)数小段,用无菌镊子夹取一段放入高压灭菌母种试管底部(以Q-1标记)[3];同样方法,切取子实体下部数小段,并且去外皮,放置母种试管底部(以Q-2标记)。均放置于25℃恒温箱无光培养待长出白色菌丝,挑去尖端菌丝,按常规操作转管,待菌丝长满试管,选取满管时间短,菌丝健壮,无污染,保藏备用。
        1.4.2 菌种培养 按无菌操作要求,分别挑取Q,Q-1,Q-2,母种3块(0.5cm2)放置盛100mL液体培养基三角瓶,25℃恒温摇床,150r/min,培养5d,备用。
        1.4.3 出草培养 小麦粒25g,料液比1∶1.2,装于500mL罐头瓶,高压灭菌,冷却接种5mL液体种。每个菌株20个罐头瓶。25℃暗室培养,待菌丝长满底部,22℃室内散射光照培养,培养室湿度80%以上。待成熟时,观察子实体性状,采集、干燥、称重,计算平均产量(g/瓶),对试验数据作方差分析。

        2 结果与分析

        由表1、表2看出,所接菌种均能出草,Q-1均表现密度大,头部膨大,表现最好,Q次之,Q-2表现最差。

      学术论文:北虫草子实体组织分离技术试验
      表1 北虫草子实体性状

      学术论文:北虫草子实体组织分离技术试验
      表2 北虫草产量,转化率分析

        由表2可知,分离Q-1与Q差异不显著,与Q-2差异极显著。根据菌种组织分离原则,分离种表现应大于或接近原始种,分离菌种才成功。由此Q-1分离种接近Q,性状相似。此结果与杨玉红[4]等研究有所差别,可能与北虫草不同品种所致,还需进一步研究。

        3 小结

        北虫草子实体分离应严格灭菌操作,转管后发现变色,发菌慢,菌丝异常,都要淘汰,一定选取发菌快,菌丝洁白,见光转色快的菌株,如此才能分离到纯正菌种。
        必须进行出草试验,长出与原始种性状相似的虫草。选取分离种Q-1,即选取鲜嫩北虫草子实体顶端靠尖1~2cm处,不去皮,结果表现性状优异,遗传性状稳定一致。

        参考文献

        [1] 许庆国.不同碳氮源对北虫草菌丝生长的影响[J].食用菌,2011(4):10-11.
        [2] 许庆国.北虫草液体培养菌种碳氮源的研究[J].食用菌,2011(6):13-14.
        [3] 林树钱.中国药用菌生产与产品开发[M].中国农业出版社,2000∶401-406.
        [4] 杨玉红,刘芳,康宗利,等.北虫草菌种人工分离的研究[J].中国食用菌,2012,31(1):11-12.

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