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    双孢蘑菇菌种国家标准

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      1 范围

          本标准规定了双孢蘑菇(Agaricus bisporus)菌种的质量要求、试验方法、检验规则及标签、标志、包装、贮运等。
          本标准适用于双孢蘑菇(Agaricus bisporus)的生产、流通和使用。

          2 引用标准

          下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。在本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
          GB191-1990 包装储运图示标准 
          GB4789.28-1994 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂
          GB9687-1988 食品包装用聚乙烯成型品卫生标准
          GB9688-1988 食品包装用聚丙烯成型品卫生标准
          GB/T12728-1991 食用菌术语
         
          3 定义

          本标准采用下列定义。
          3.1 母种 stock culture
          经各种方法分离、选育或杂交得到的具有出菇能力的菌丝体纯培养物及其继代培养物。
          3.2 原种 pre-culture spawn
          由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。
          3.3 栽培种 spawn
          由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。
          3.4 拮抗现象 antagonism
          具有不同遗传基因的菌落间产生不生长区带或形成不同形式线形边缘的现象。
          3.5 无棉塑料盖 plastic stop
          可代替塑料盖,带有某种高分子或纤维材料可满足滤菌和透气要求的塑料盖。
          3.6 玻璃菌种瓶 glass spawn bottle
          圆柱形,容积750mL,耐126℃高温,无色、淡绿色或淡兰色的透明玻璃瓶。瓶体总高190mm±2mm,瓶颈高25mm±1mm,瓶口外径40mm±1mm,瓶体外径82mm±1mm。
          3.7 塑料菌种瓶 polypropylene spawn bottle
          圆柱形,容积850mL,耐126℃高温,白色、半透明,卫生标准符合GB9688规定的塑料瓶。瓶体总高165mm±2mm,瓶颈高28mm±1mm,瓶口外径63mm±1mm,瓶体外径90mm±1mm。
          3.8 角变 sector
          因菌丝体局部变异或感染病毒而导致菌丝变细、生长缓慢、菌丝体表面特征成角状异常的现象。
          3.9 高温抑制线 high temperatured line
          食用菌菌种在生长过程中受高温的不良影响,培养物出现的圈状发黄、发暗或菌丝变稀弱的现象。
          3.10 同工酶 isoenzyme
          催化相同生化反应,而结构及理化性质不同的酶分子。通过凝胶电泳使同工酶分离成迁移率不同的区带,经生物化学染色后显示出的同工酶谱,可对生物品种进行酶分子水平的鉴别或鉴定。

          4 质量要求

          4.1母种
          4.1.1 容器规格 采用18 mmX180mm、20mm X200mm的玻璃试管。
          4.1.2 培养基 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基),按GB4789.28中4.79规定配置。  
          4.1.3感官指标 符合表1规定。
          表1
          项目        要求
          棉塞或无棉塑料盖  干燥、洁净、松紧适度,能满足透气和滤菌要求
          培养基灌入量     为试管总体积的十分之一至五分之一
          培养基斜面长度   为试管总长度的二分之一至五分之一
          斜面接种块大小    3-5mm×3-5mm
         
          培养基斜面正面外观
          菌丝体特征洁白或米白、浓密、羽毛状或叶脉状
          菌丝体表面均匀、平整、无角变
          菌丝分泌物 无
          菌落边缘整齐,无膏状、蜡状细菌或酵母菌菌落及霉菌菌落
          培养基斜面背面外观 培养基不干缩,颜色均匀、无暗斑、无色素
          培养物气味有双孢蘑菇菌种特有的香味,无酸、臭、霉等异味
          培养物镜检 菌丝粗壮,无杂菌菌丝及孢子,无虫及虫卵。
          4.1.4 菌丝生长速度 在适温(24℃±1℃)下,15-20天长满试管。
          4.1.5 母种遗传和栽培性状 供种单位,母种需经酯酶(Est)同工酶类型鉴定,确认其遗传类型与对照相
          同后,需再经出菇试验确定产量及品质等栽培农艺性状合格后,方可用于扩大繁殖或出售。
          4.1.5.1菌丝体Est同工酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳类型 包括G型(呈现e1,e3特征带)、H型(呈现e2,e4和e30-33特征带)、HG1~HG2型(呈现e1,e3,e30-33特征带)和HG4型(呈现e1,2,3,4和e30-33特征带)等。以Est区带向正极泳动距离与溴酚蓝指示剂向正极泳动距离的比值作为电泳相对迁移率(Rm)。e1,e2,e3,e4,e30,e31,e32和e33的Rm值分别为0.820,0.810,0.760,0.750,0.128,0.100,0.070和0.010。
          4.1.5.2 菌丝萌发、定植能力 接种到适合的培养基后,在正常条件下24小时内萌发恢复,定植迅速、菌丝健壮,20天以内长满培养基。
          4.1.5.3 结菇转潮能力 覆土后12~16天结菇,分布均匀;18~22天采菇,每潮菇间隔7~10天。
          4.1.5.4 抗逆性 对温度、湿度、酸碱度等生长条件变化耐受能力较强;对主要病虫害的抵抗能力较强。
          4.1.5.5 生物学效率 在正常条件下生物学效率不低于30%。
          4.2 原种
          4.2.1 容器规格 玻璃菌种瓶或塑料菌种瓶,分别符合3.6和3.7规定。
          4.2.2 培养基
          4.2.2.1 腐熟麦杆或稻杆(干)77%,腐熟牛粪粉(干)20%,石膏粉1%,碳酸钙2%,含水量62%±1%,pH7.5。
          4.2.2.2 腐熟棉籽壳(干)97%,石膏粉1%, 碳酸钙2%, 含水量55%±1%, pH7.5。
          4.2.3 感官指标 符合表2规定。
          表2
          项目            要求
          棉塞或无棉塑料盖      干燥、洁净、松紧适度,能满足透气和滤菌要求
          培养基上表面距瓶口的距离  50 mm±5mm
          接种量           每支母种接原种 4-6瓶
          菌种瓶外观
          菌丝体特征  洁白浓密、生长旺健
          培养物表面菌丝体生长均匀,无角变,无高温抑制线
          培养基及菌丝体紧贴瓶壁,无干缩
          培养物表面分泌物  无
          各种杂菌孢子、菌丝  无
          拮抗现象  无
          培养物气味 有蘑菇菌种特有的香味,无酸、臭、霉等异味
          培养物镜检 菌丝粗壮、无杂菌菌丝和孢子、无虫及虫卵
          4.2.4菌丝生长速度:原种瓶应发满菌丝,在适温(24℃±1℃)下菌丝长满瓶不超过45天。
          4.3 栽培种
          4.3.1 容器规格: 玻璃菌种瓶或塑料菌种瓶,也可采用不小于15cm×28cm,厚0.04mm-0.06mm的聚丙烯塑料袋。塑料袋的卫生标准符合GB9687和GB9688规定。
          4.3.2 培养基 除同4.2.2.1和4.2.2.2外,另可用以下两种。
          4.3.2.1 谷粒98%,石膏粉2%, 含水量50%±1%, pH7.5~8.0。
          4.3.2.2 其它经省级或省级以上鉴定适合于双孢蘑菇菌丝生长的培养基。
          4.3.3感官指标 符合表3规定。
          表3
          项目要求
          棉塞或无棉塑料盖 干燥、洁净、松紧适度,能满足透气和滤菌要求
          培养基面距瓶(袋)口的距离 50 mm±5mm
          接种量 每瓶原种接栽培种 30-50瓶(袋)
          菌种瓶(袋) 外观
          菌丝体特征 洁白浓密、生长旺健
          不同部位菌丝体 生长均匀,无角变,无高温抑制线
          培养基及菌丝体 紧贴瓶(袋)壁,无干缩
          培养物表面分泌物 无
          各种杂菌孢子、菌丝 无
          拮抗现象 无
          培养物气味 有蘑菇菌种特有的香味,无酸、臭、霉等异味
          培养物镜检 菌丝粗壮、无杂菌菌丝和孢子、无虫及虫卵
          4.3.4 菌丝生长速度 栽培种瓶(袋)应发满菌丝,在适温(24℃±1℃)下菌丝长满菌种瓶(袋)不超过45天。
          4.3.5 种源 应使用通过省级或省级以上菌种审定委员会审定、认定或登记的品种,并从具有相应技术资质的供种单位引种。

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