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    灵芝菌种保藏七法

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        灵芝菌丝容易木质化,要想保持灵芝菌种的新鲜、优质,必须妥善保藏菌种,使灵芝菌株新陈代谢速率减缓,避免菌种衰老死亡。一般来说应将菌种放置在清洁干燥、冷冻、低温、缺氧的环境中保存。现具体介绍以下几种方法:

        一 试管斜面低温(冰箱)保藏法

        在母种试管外面包一层塑料薄膜或牛皮纸,也可用硅胶塞代替棉塞,以防水分蒸发,而后置于冰箱内在4℃条件下保存,菌丝在此温度下几乎停止生长而处于“休眠”状态,代谢作用缓慢从而延长保存时间。

        保存过程中要注意几点:

        1、温度不能太低,否则斜面培养基易脱水结白而冻死菌种。

        2、低温保存的菌种,每隔三、四个月须转管一次。

        3、保存期间要经常检查棉塞是否受潮,否则要及时更换棉塞(无菌棉塞),以免感染杂菌。

        4、对于低温保存较长的菌种,使用前必须先把菌种放在适宜温度下让其“苏醒”“活化”,恢复菌丝的生命活力。

        该方法简单易行,设备仪器简便,应用范围广,无论科研单位还是栽培生产单位,都可采取低温保存菌种,但由于经常要转接试管,代数过多会退化菌种,且费工费时。

        二 石蜡保藏法

        将要保存的灵芝菌种移接到cpda培养基斜面上,在25℃左右的恒温中培养7天左右,然后用液体石蜡封藏保存。石蜡要选化学性纯的,首先在121℃下高压灭菌30~60分钟,连续灭菌2次,再用无菌吸管灌注到斜面上,液体石蜡以高出斜面尖端1cm为宜,然后置于室内干燥处或冰箱中保存,用石蜡封闭,隔绝了菌丝与空气接触,防止水分蒸发,菌株新陈代谢减缓,菌种保存时间延长,一般可保存5年以上,但以l、2年移植一次为好。

        需用菌种时,从试管中抽取菌丝移植到pda培养基斜面上进行活化培养,即可作菌种用。

        保存过程中要注意几点:

        1、为防止封闭石蜡后灵芝菌丝再生长,应适当延长菌丝的培养时间。

        2、倒入的石蜡不能低于斜面尖端,否则液体石蜡挥发快,斜面培养基易干涸。

        3、石蜡灭菌要彻底,否则菌种易感染杂菌。

        4、定期检查棉塞是否污染,培养基是否露出石蜡液面,如露出液面,要及时灌注无菌石蜡。

        5、菌种必须垂直放置,否则棉塞易受污染。

        三 白胶塞封口

        保存法选择与试管口径相符合的白胶塞,用0.2%煤酚皂溶液洗涤,浸泡在95%乙醇内保存。当试管斜面长满菌丝后,无菌操作,拔去棉塞,取浸泡的白胶塞一个,通过火焰快速塞入试管口,并用石蜡封存。

        此法与石蜡保存效果相同,一般可保存菌种几年,但以每年移植一次为好。

        四 麦鼓保存菌种法

        选取新鲜的麦鼓用适量的清水调湿,然后装入试管,占试管总长的五分之二,洗净管壁上的麦麸,塞好棉塞,常规方法灭菌后接种培养,5~7天后,当菌丝长满培养基表面,放入真空干燥器中将培养基内水分抽干,然后移入盛有氯化钙的干燥器内,用凡士林密封,常温下保存。此法保存灵芝菌种存活力在1年以上。制作过程中注意灭菌彻底,无菌操作。

        五 木屑保存菌种法

        选用阔叶杂木屑78%、麦麸20%、白糖、石膏各1%,加适当的水调湿,分装试管,占试管的三分之四长,在1.2~1.5kg/cm2高压下灭菌40分钟左右,冷却后无菌接入灵芝菌种,适宜条件下培养10~15天,菌丝接近长满木屑时,用石蜡熔封管口,或换上无菌白胶塞,置常温或冰箱中保存。

        该法只要木屑不干涸,可保持菌种活力3年以上,保存时应注意:

        1、木屑只能用阔叶杂木屑,松、杉、樟树等有芳香气味的不能用。

        2、水分含量适宜,灭菌彻底。

        六 木块保存菌种法

        将阔叶树木切成1cm3或1cm×1cm×2cm的小木块,把木块置于1%葡萄糖水中浸泡,湿透,或用0.2%磷酸二氢钾、0.3%的尿素配制液中浸泡2小时,然后按20%木屑、80%木块比例混合,含水量60%~70%左右,拌匀后装入试管,试管最下部与上部均有1~2cm厚的木屑,中间为木块,装好试管后高压灭菌40分钟,冷却后接种培养7天,然后取出,密封管口,置冰箱中保存。

        七 地下保存法

        在室内阴凉处挖个坑,埋一只小坛子,坛口低于地面,四周填实,上面用水泥抹平并浇制一只盖子,使用时用塑料袋装些生石灰,放人坛底,把要保存的菌种用薄膜包扎好后放人坛内,盖好坛盖即可。一般每2~3个月转管一次。

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