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    平菇液体菌种发酵条件的研究

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      平菇液体菌种发酵条件的研究

      邱立友 张建威
      (河南农业大学生物工程学院,郑州450002)
      答旭东
      (平顶山市酿造总厂)
      余培威
      (郑州市奥克啤酒厂)

      河南农业科学 2000年第10期

        摘要 研究了培养基组成、pH值、粘度、摇瓶装液量和添加有机氮对平菇P831液体菌种发酵生产的影响。结果表明,选用麸皮培养基可获得较高的菌球数和菌丝量,菌球在PDA平板中的生长速度是马铃薯培养基和玉米粉培养基的1.6倍和2.0倍。发酵生产适宜的pH值为7.0。500ml摇瓶装液量为125ml。在培养液中添加0.4%的琼脂增加粘度,菌球直径由0.65mm下降至0.35mm,菌球数和菌丝童分别提高68.4%和164%0添加0.1%和0.3%的蛋白胨平均提高菌丝量59.4%。

        关键词 平菇 液体菌种 发酵条件

        平菇液体菌种与其传统的固体菌种相比,具有生产效率高、接种简便、接种点多、发菌快、抗杂性强等优点,因而应用越来越广泛。影响平菇液体菌种发酵生产的因素,包括有培养基的组成、pH值、粘度以及通风量等。我们对有关平菇液体菌种的发酵条件进行了探讨。

        1 材料与方法
        1.1 菌种
        平菇P831(Pleurotuso streatus P831),由河南农业大学生物工程学院菌种厂提供。
        1.2 培养基及培养方法
        1.2.1 斜面菌种采用PDA培养基,25℃培养120个小时。
        1.2.2 液体菌种培养基的筛选 用3个500ml三角瓶,分别装入100ml马铃薯培养基、玉米粉培养基和麸皮培养基,接入1cm2PDA斜面菌种,25℃,150~180r/min旋转摇床培养120个小时。
        1.2.3 培养液pH值的调节 用NaOH溶液将麸皮培养基pH值分别调至pH为4.0,5.0,6.0,7.0和8.0。
        1.2.4 培养液粘度的调节 在麸皮培养基中添加0.2%~0.5%的琼脂,以调节其粘度。
        1.2.5 培养液装液量对菌种生产的影响 设5种装液量,分别为50,75,100,125,150ml.
        1.2.6 培养液中添加有机氮对菌种生产的影响 在麸皮培养液中分别添加0.1%和0.3%的酵母菌或蛋白陈,观察对菌种生产的影响。
        1.3 测定方法
        1.3.1 菌球个数和大小测定 准确吸取培养液5ml,滴于直径为9cm的培养皿中,计其菌球个数,并测量菌球直径。
        1.3.2 菌丝量的测定 将培养液用二层纱布过滤后,再用蒸馏水冲洗数次,沥干,然后在60℃恒温箱中烘5小时,置于干燥器中冷却至室温,用光电分析天平称重。计算每100ml培养液中菌丝干重。
        1.3.3 菌丝生长速度测定 在显微镜下挑取培养液中的单个菌球接在PDA平板中央,25℃培养,从第12小时开始,采用十字法测定菌丝生长速度[3]。
        1.3.4 培养液pH值测定 采用酸度计法。

        2 结果与分析
        2.1 液体菌种培养基的优选 从表1可见,在三种培养基中,麸皮培养基的菌球数最高,达55个/ml,分别是马铃薯培养基和玉米粉培养基菌球数的3.9倍和4.6倍。麸皮培养基和玉米粉培养基中菌球的直径小于1.0mm,比较适宜;而马铃薯培养基中菌球直径大于1.0mm,不利于液体培养时溶氧和营养物质的传递,这可能与其培养基粘度较小有关。培养基中菌丝量以麸皮培养基的最高,分别是马铃薯和玉米粉培养基的11倍和19倍,且菌球生长速度快,为27.0mm/d,分别是前两种培养基的1.6倍和2.0倍。综合以上比较,麸皮培养基明显优于另两种培养基。故以下实验均选用麸皮培养基。

      表1 三种液体培养基培养平菇P831的结果

      平菇液体菌种发酵条件的研究

        2.2 培养液pH值对液体菌种生产的影响 从表2可以看出,培养液pH值对平菇P831液体菌种的发酵生产同样有较大的影响。培养基pH值在4.0,5.0和8.0偏酸性和偏碱性时,菌球数均较少,菌丝量较低;pH值在6.0微酸性时,菌球数较多,菌丝量也较高;当pH值为7.0时,菌球数最多,菌丝量最高。表明液体菌种生产适宜pH值为7.0。从表2还可以看出,当pH值在微酸性和中性时,菌球直径较大,而当pH值偏酸性和偏碱性时,菌球直径较小,其原因有待进一步探讨。

      表2 培养液pH值对平菇P831菌种生长的影响

      平菇液体菌种发酵条件的研究

        2.3 培养液粘度对液体菌种生产的影响 从表3可见,随着在培养液中添加琼脂量的增加,即培养液粘度加大,菌球直径明显缩小。与不加琼脂的对照相比,在培养液中添加0.4%的琼脂,菌球直径由对照的0.65mm下降到0.35mm,菌球数和菌丝量比对照分别提高68.4%和164%。

      表3 培养液不同粘度对平菇P831菌种生长的影响

      平菇液体菌种发酵条件的研究

        2.4 培养液装量对液体菌种生产的影响 当摇床旋转频率一定时,摇瓶中装液量越少,培养液溶氧速率越高,越有利于增加菌体与氧接触的机会。然而,过高的溶氧速率对菌体生长并非有利。当装液量为50ml和75ml时,菌球数分别为4个/ml和5个/ml,菌丝量也较低。当装液量增至150ml时,菌丝量虽然较高,iii菌球数同样较少,为9个/ml。装液量为100ml和125ml时,菌球数和菌丝量均较高。适宜的装液量为125ml,其菌丝量最高(表4)。

      表4 通风量对平菇P831菌种生长的影响

      平菇液体菌种发酵条件的研究

        2.5 培养液中添加有机氮对液体菌种生产的影响 在麸皮培养液中分别添加0.1%和0.3%的酵母菌或蛋白陈,尽管菌球数与对照相比差别不大,但菌丝量与对照相比均有明显提高。添加酵母菌和蛋白脏,菌丝量平均比对照分别提高59.7%和59.1%。然而,添加酵母菌后菌球直径则由对照的0.60mm增大至1.10mm,对生产不利(表5)。

      表5 添加有机氮化合物对平菇P831菌种生产的影响

      平菇液体菌种发酵条件的研究

        3 小结
        食用菌液体菌种发酵生产指标包括有菌球数、菌球直径、菌丝量和菌球萌发生长速度等。研究表明,在常用的三种培养基中发酵生产平菇P831液体菌种,麸皮培养基明显优于马铃薯培养基和玉米粉培养基。平菇P831液体菌科发酵生产适宜的pH值是7.0,500ml摇瓶中装培养液125ml,添加0.4%的琼脂可明显提高菌球数、缩小菌球直径和增加菌丝量。添加0.1%和0.3%的蛋白陈,可明显提高菌丝量。

        参考文献
        1 郭成金,李爱民,孟庆恒等.平菇液体菌种的生产应用,食用菌,1996(4):12~13
        2 何佳,赵启英,田娟增稠剂对食月菌深层发醉的影响. 食用菌.1999(3):10~11
        3 宋漳,黄耀坚.不同菌株中拮抗菌筛选及对绿色木毒的拮抗试验.中国生物防治.1997,13(1)_21~22

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