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    银耳菌种组织分离与基内分离技术初探

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      银耳菌种组织分离与基内分离技术初探

      钟长科
      (福建古田县农业局,福建古田 352200)
      《食用菌》2014.2

        银耳是古田县特产,2012年全县栽培银耳规模达3.68亿袋,其产量达到28万t,占全国的90%以上。全县每年需要的银耳菌种达1000万瓶以上,因其品种的特异性,目前银耳菌种的制件方法主要采用组织分离和基内分离相结合的方法进行,较少采用纯菌丝分离法。近几年来,笔者在银耳菌种分离生产方面进行一些探索。现总结如下:
        1 培养基制备
        银耳菌种培养基的配方较讲究,必须采用纯度较高的白楠树木屑,白楠木砍后任凭风吹雨打半年以上,切片,晒干,过2mm筛网粉碎。配方为白楠木屑65%,优质麦皮33%,优质石膏粉1%,白糖1%,含水量62%~65%,pH值自然。制作时将木屑、麸皮、石膏粉拌匀,倒入相应的糖水,搅拌均匀后过筛、装750mL瓶、压平高度至瓶肩、清刷、塞棉花塞。然后装入高压灭菌锅内灭菌,当锅内压力达0.05MPa时,充分排除锅内冷气体;当锅内压力达0.20MPa时开始计时,并排气至0.15MPa,保持火力,不能减弱,保持锅内压力0.20MPa2h,排气口开一点,让其有少量的气体排出。灭菌结束后,排去锅内的蒸汽并卸出灭完菌的培养基,排到冷却室让其自然冷却等待接菌。若气温高于25℃时,先预冷30min后,把原种培养基推到有制冷设备房间内进行强制冷却。
        2 分离材料选择
        2.1 菌袋 从商品化银耳栽培的群体中,选择生长期28~33d,朵形完好,朵大5~8cm,耳片肥厚、舒展、无病虫的种耳作为分离材料(图1)。但由于栽培袋银耳耳片分离常带有污染物,分离成功率低。
        2.2 种瓶 从银耳原种中选择优良的菌株作为母种,其生长时间35~38d左右,瓶壁内香灰菌丝爬壁力强,基内香灰菌丝生长有力,转色好,培养基开始收缩,朵大4~5cm,耳片生长没碰到瓶壁,朵型圆正,生长健壮,耳片白且厚,色泽滑润。
        3 组织分离方法
        3.1 菌袋分离 在接种箱内按无菌操作要求,用锋利的刀片切取一片1~2cm2大小的银耳耳片,用镊子夹住耳片放入无菌水里冲洗三次,然后放到灭菌过的木屑培养基中,用记号笔作好标签。用同样的方法接种3~5瓶。
        3.2 种瓶分离 在接种箱内按无菌操作要求,破开母种瓶,用锋利的刀片切取一片1~2cm2大小的银耳耳片,放在灭菌过的木屑培养基中,用记号笔作好标签。用同样的方法接种3~5瓶。
        4 基内分离
        4.1 菌袋分离 将银耳子实体采下,把耳基从菌袋挖出,用接种铲去除耳基底表面的棉子壳至白色坚硬的耳基,用接种针挑取黄豆粒大小的耳基到灭菌的木屑培养基表面中心点,用记号笔作好标签。用同样的方法接种20~30瓶。
        4.2 种瓶分离 母种破瓶后,用接种铲把子实体铲除,挖出表面的培养基,把耳基表面的黑斑挖去,耳基周边的木屑也挖出,露出整个耳基。用接种针挑取黄豆粒大小的耳基至灭菌过的木屑培养基表面中心点,用记号笔作好标签。用同样的方法接种30~40瓶。
        4.3 耳片种瓶 由于银耳耳片在生长过程中表面含有银耳的香灰菌丝,将耳片挑到新培养基上时能萌发香灰菌丝,同时耳片能弹射出银耳孢子并萌发。经过半个月的培养,两种菌丝生长正常后,在接种箱内,将表面的耳片挑出。继续培养25d左右即可生长出银耳子实体,选择子实体和菌丝生长的情况符合银耳品种特性作为母种进行扩繁,方法同上。
        5 菌种培养关健技术
        将接种的培养基放到21~23℃的培养室内培养,每天通风两次,每次30min。7d后进行检查看是否有污染,及时去除被污染。15d检查一次,菌丝走到离瓶底1cm时再检查一次,主要去除被污染和菌丝不整齐,转色不好的。35d左右,选择子实体生长健壮、朵型圆正、耳片白且厚、朵大3~4cm,瓶内壁菌丝生长有力,爬壁力强,可作为母种,进行基内组织分离,提纯复壮。
        6 提纯复壮优化质量
        将用上方法取得的菌种在接种箱内按无菌操作要求,用接种铲将基质块表面老菌丝铲除,取中下层基质块,挑取黄豆粒大小基质块,接入已灭菌过的木屑培养基内(其培养基配方同前面介绍)上面。用同样方法接30~50瓶。置于室温2l~23℃的培养室内培养,7d检查,是否有污染,及时去除被污染。15d检查一次,菌丝走到离瓶底1cm时再检查一次,主要去除被污染的和菌丝不整齐,转色不好的。经35d培养后,选其中香灰菌丝长势均匀,吃料快,白毛团胶质化快、出耳早、朵型圆正、耳片伸长好、无杂菌污染的为原种。进一步扩繁栽培种,用于生产栽培用。
        7 讨论
        利:银耳菌种特性保持好,银耳菌丝纯正,香灰菌丝强,出菇早,菇生长快、产量高。
        弊:多次基内分离也会造成种性退化,在现有仅靠肉眼观察的条件下,不能很好发现。以致杂菌、放射菌(俗称杨梅酸菌)、细菌等的潜藏和退化仍然是不可克服,致使种质不纯,影响栽培效益。因此还有待研究,需要从原料选择、灭菌、接种和培养等环节加强管理,是提高种性稳定的重要手段。

        作者简介:钟长科,农艺师,主要从事食用菌栽培技术推广工作。

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