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    文献资料:北虫草菌种人工分离的研究

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      北虫草菌种人工分离的研究

      杨玉红 刘芳 康宗利 段玉玺

      沈阳农业大学植物保护博士后流动站;沈阳农业大学生物科学技术学院

      《中国食用菌》2012年01期

      1 材料与方法

        1.1 材料试剂与仪器

        1.1.1 供试菌株
        沈阳棋盘山野生的蛹虫草菌株。

        1.1.2 培养基
        马铃薯100 g、葡萄糖10 g、牛肉膏5 g、KH2PO40.5g、MgS04 0.25 g、琼脂10 g,加蒸馏水至500 mL,煮沸使琼脂完全融化,高压蒸汽灭菌1210℃,30 min。

        1.1.3 试剂
        75%酒精,无菌水。

        1.1.4 主要仪器
        手提式压力蒸汽灭菌锅、分析天平、超净工作台、HPX一9082MBE数显电热培养箱,其他常用玻璃仪器等。

        1.2 试验方法

        1.2.1 不同的组织部位分离方法比较
        ①、子实体分离法
        在超净工作台上将虫草子实体用75%酒精浸泡1 min,无菌水冲洗3次,再用小刀分别切取子实体顶端、中部、根部,然后接种到斜面培养基上,18。C恒温培养15 d。观察不同组织部位对北虫草萌发天数、长势、满管时间的影响。
        ②、孢子分离法
        上述方法洗涤得到的子实体,用小刀切取尖端,悬挂在二三角瓶棉塞下端的不锈钢弯钩上,通过悬挂虫草子实体,使顶端朝下,散落下来的孢子落在培养基上,从而继续生长,并产生白色菌丝。在培养的前期,要保证室温不能过高,因此本试验在培养时,将三角瓶置于充满凉水的盆中,并需要每天换水,维持较低的水温。在18℃恒温培养5 d后,无菌条件下取出子实体尖端,将三角瓶放回,
      继续培养10 d。

        l.2.2 不同的消毒方式比较
        以子实体顶端为例,处理方法见表1。
        接种到斜面培养基上,18℃恒温培养15 d。观察不同消毒方式对北虫草萌发天数、长势、满管时间的影响。

        1.2.3 继代培养试验
        挑选长势好的分离菌种,接种到玻璃瓶中,将玻璃瓶放人培养室培养。

      2 结果与分析

        2.1 组织分离法分离北虫草菌种的研究

        2.1.1 不同组织部位对北虫草萌发天数的影响
        通过对同一株北虫草分别切取顶端、中端和根部,采用相同的消毒方式进行除菌。可以看出,在培养的最初阶段,在培养顶端和中端部位的试管中,北虫草两端均有白色菌丝生长,而在培养根部部位的试管中,没有白色菌丝生长(图1)。

        2.1.2 不同组织部位对北虫草长势的影响
        匍匐型菌丝的有无可作为判定菌种优劣的依据,其量越多,菌种质量越优。随着培养时问的延续,在培养3种不同北虫草部位的试管中,均产生了白色菌丝,长势上并没有出现差异。

        2.1.3 不同组织部位对满管时间的影响
        经过若干天的培养,3种不同部位的北虫草菌丝体并未出现明显的满管现象。

        2.1.4 孢子分离法分离北虫草菌种的研究
        孢子分离法培养前期如图2一A,培养2 d后,培养基上已有少量的菌丝生成(图2一B),培养5 d后,培养基上已经形成了大量的菌丝(图2-C)。此时,在无菌条件下取出子实体,继续培养10 d。
        从萌发时间和长势上看,孢子分离法分离得到的菌株品质更优。

        2.2 不同消毒方式的影响

        2.2.1 不同消毒方式对北虫草萌发天数的影响
        北虫草子实体本身就具有一定的抑菌能力㈣,即便未用酒精进行消毒处理,在菌丝体的两端也有菌丝生成,并且未经过酒精处理的菌丝体(1号、2号)萌发较早、较旺
      盛。

        2.2.2 不同消毒方式对北虫草长势的影响
        未经过酒精处理的2组长势较好,并且有明显的匍匐状菌丝出现。而经过酒精处理过的3组长势一般,其中后2组还有未出现菌丝的情况发生,出现这种状况的原因可能是由于在使用酒精消毒的过程中,浸泡时间过长,使菌丝体活性丧失。

        2.2.3 不同消毒方式对北虫草满管时间的影响
        未经过酒精消毒的2组(1号、2号)北虫草菌丝体,在培养8 d后,菌丝体长满了整个试管,而其余几组则没有满管的现象出现。

        2.3 继代培养验证

        孢子分离法分离得到的菌株,经继代培养得到的虫草子实体(图3),色泽和产量都很好,这验证了孢子分离法分离得到的菌株品质更优这一结论。
      图3孢子分离法分离得到的菌株继代培养得到的虫草子实体

      3 结论与讨论

        3.1 结论

        通过实验可得出,第一,子实体靠近顶端分离的菌种易于萌发,孢子分离得到的菌种品质更优;第二,北虫草子实体本身就具有抑菌作用,因此,在选取表面消毒方式时,一定要适宜,不可时间过长,以免对子实体造成伤害,不产生菌丝。

        3.2 讨论

        目前国内有关北虫草的研究很多,但多为分类、品种资源分布方面的工作,栽培生产方面的研究报道尚少,对此菌的生物学特性、遗传特性等尚未尽悉搞清。在组织分离获取菌种的实验中发现,在子实体有龟背状花纹的顶端切取组织,获得的菌种种性优,产量高。北虫草菌种转管次数增多,子实体产量下降,生产上菌种转管次数不宜超过3次。

        参考文献(略)

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